Разработка УФ-спектрофотометрического метода количественного определения метаболита клопидогрела, пригодного для химико-токсикологического анализа

DOI: https://doi.org/10.29296/25419218-2022-07-03
Номер журнала: 
7
Год издания: 
2022

Л.С. Аносова(1), И.П. Ремезова(2), А.М. Агафонов(1)
1-Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького,
ДНР, 283003, Донецк, пр. Ильича 16
2-Пятигорский медико-фармацевтический институт — филиал ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России, 357500, Россия, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11

Введение. В России более 50% всех заболеваний и 20% всех случаев инвалидности приходится на долю ишемической болезни сердца и инсульта. Согласно рекомендациям Российского кардиологического общества и Европейского общества кардиологов, в стандарты лечения больных СОVID-19 входит антитромбоцитарная терапия клопидогрелом. Клопидогрел является пролекарством, при помощи эстераз происходит гидролиз с образованием основного (неактивного) циркулирующего метаболита – производной карбоновой кислоты, который составляет 85% всех метаболитов данного препарата. По информации, приведенной в научной литературе за последние 10 лет, клопидогрел представляет интерес с точки зрения химико-токсикологических исследований, поскольку данный лекарственный препарат очень часто становится «препаратом выбора» в целях суицида. Цель исследования: разработка и валидация методики количественного определения основного метаболита клопидогрела – клопидогрел карбоновой кислоты с помощью доступного и широко внедренного в практику химико-токсикологического анализа метода УФ-спектрофотометрии. Материал и методы. Объекты исследования – клопидогрел карбоновая кислота (СLА) субстанция-порошок. Светопоглощение растворов в УФ-спектре измеряли на спектрофотометре СФ-46 (АО «ЛОМО», Россия), спектральный диапазон измерений – от 200 до 350 нм. Использовали стандартный раствор клопидогрел карбоновой кислоты в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты (100 мкг/мл). Результаты. Для количественного определения основного метаболита клопидогрела (клопидогрел карбоновой кислоты) оптимальная длина волны составляет 278 нм. Калибровочный график для УФ-спектрофотометрического метода описывался уравнением: А=0,004128C – 0,008667. Линейность наблюдали в пределах концентраций клопидогрел карбоновой кислоты 20,0–200 мкг/мл; LOD и LOQ в пробе составили соответственно 1,655 и 5,015 мкг. Заключение. Разработанная методика количественного определения основного метаболита клопидогрела – клопидогрел карбоновой кислоты с использованием УФ-спектрофотометрического метода удовлетворяют требованиям к методам, рекомендованным для использования в судебной токсикологии, что подтверждено валидационными характеристиками.
Ключевые слова: 
клопидогрел
метаболит
клопидогрел карбоновая кислота
УФ-спектрофотометрия
Для цитирования: 
Аносова Л.С., Ремезова И.П., Агафонов А.М. Разработка УФ-спектрофотометрического метода количественного определения метаболита клопидогрела, пригодного для химико-токсикологического анализа . Фармация, 2022; (7): 18-24https://doi.org/10.29296/25419218-2022-07-03
Список литературы: 
  1. Nijenh V.J. uis et al. Anticoagulation with or without Clopidogrel after Transcatheter Aortic-Valve Implantation. N. Engl. J. Med. 2020; 382 (18): 1696–707. DOI: 10.1056/NEJMoa1915152
  2. Żurowska-Wolak M., Owsiak M., Bartuś S., Mikos M. The influence of pre-hospital medication administration in ST-elevation myocardial infarction patients on left ventricular ejection fraction and intra-hospital death. Postepy Kardiol Interwencyjnej. 2021; 17 (1): 39–45. DOI: 10.5114/aic.2021.104766
  3. Pena A., Collet J.P., Hulot J.S. et al. Can we override clopidogrel resistance. Circulation. 2009; 119 (21): 2854–7.
  4. Голухова Е.З., Григорян М.В., Рябинина М.Н. Современные аспекты фармакогенетики клопидогрела и его клиническое значение. Креативная кардиология. 2014; 3: 39–52.
  5. Редькіна Є.А., Ткаченко Н.О., Гладишев В. В. Маркетингові дослідження українського ринку анти- агрегантів. Фармацевтичний журнал. 2016; 3–4: 12–5.
  6. Аносова Л.С. Распределение клопидогрела в органах отравленных животных. Фармация. 2021; 70 (6): 31–6. DOI: 10.29296/25419218-2021-06-06
  7. Державна Фармакопея України. Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». Доповнення 2. Харків: РІРЕГ, 2008; 608.
  8. Kocabay G., Okçular I., Akkaya V., Güler K. Suicide attempt with clopidogrel. Hum. Exp. Toxicol. 2006; 25 (12): 731–4.
  9. Borderías C.L., Garrapiz L.J., Caballero G. Pulmonary haemorrhage and haemothorax after massive ingestion of clopidogrel as a suicide attempt. Arch. Bronconeumol. 2009; 45 (11): 570–1. DOI: 10.1016/j.arbres.2009.06.009.
  10. Al Asmar R., Zeid F. Acute Hemothorax Causing Hemorrhagic Shock Following Small-bore Thoracocentesis in a Patient on Clopidogrel: A Case Report and Literature Review. Cureus. 2020; 12 (3): e7431. DOI: 10.7759/cureus.7431.
  11. Attimarad M. Simultaneous Determination of Ofloxacin and Flavoxate Hydrochloride by Absorption Ratio and Second Derivative UV Spectrophotometry. J. Basic Clin. Pharm. 2010; 2 (1): 53–61.
  12. Stolarczyk M., Apola А., Maślanka А. et al. Spectrophotometric method for simultaneous determination of valsartan and substances from the group of statins in binary mixtures. Acta Pharm. 2017; 67 (4): 463–78. DOI: 10.1515/acph–2017–0031
  13. Stolarczyk M., Maślanka А., Apola А. et al. Derivative spectrophotometric method for simultaneous determination of zofenopril and fluvastatin in mixtures and pharmaceutical dosageforms. Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2015; 148: 66–71. DOI: 10.1016/j.saa.2015.03.100
  14. Parojcić J., Karljiković–Rajić K., Durić Z. et al. Development of the second–order derivative UV spectrophotometric method for direct determination of paracetamol in urine intended for biopharmaceutical characterisation of drug products. Biopharm. Drug Dispos. 2003; 24 (7): 309–14. DOI: 10.1002/bdd.367.
  15. Durán Merás I., Espinosa Mansilla A., Salinas López F., Rodríguez Gómez M. Comparison of UV derivative–spectrophotometry and partial least–squares (PLS–1) calibration for determination of methotrexate and leucovorin in biological fluids. Anal. and Bioanal. Chem. 2002; 373 (4–5): 251–8. DOI: 10.1007/s00216–002–1348–1.
  16. Вергейчик Т.Х., Линникова В.А., Гуськова Г.Б. Химико–токсикологический анализ биологических объектов на метопролол и кветиапин. Изв. Самарского науч. центра Рос. академии наук. 2012; 14 (5 (3)): 700–3.
  17. Tolba M.M., Salim M.M. Derivative Quotient Spectrophotometry and an Eco–Friendly Micellar Chromatographic Approach with Time–Programmed UV–Detection for the Separation of Two Fluoroquinolones and Phenazopyridine. J. Chromatogr. Sci. 2016; 54 (5): 776–89. DOI: 10.1093/chromsci/bmw010.
  18. Барам Г.И., Рейхарт Д.В., Гольдберг Е.Д. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в фармакопейном анализе. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003; 135 (1): 75–9.
  19. Бондар В.С., Аносова Л.С. Високоефективна рідинна хрома- тографія в аналізі клопідогрелю. Фармацевт. часоп. 2012; 4 (24): 73–8.
  20. Pawaskar P.S. et al. Development of Reverse Phase Liquid Chromatographic Method for Deter- mination of (+)-(S)-(o-Chlorophenyl)-6,7- Dihydrothieno [3,2-c] pyridine-5(4H)-acetic acid,Hydrochloride and Methyl (+/-) – (o- Chloro phenyl)-4,5-Dihydrothieno[2,3-c] pyridine-6(7H)-acetate, Hydrochloride from Clopidogrel Besylate. Int. J. Pharm. Res. Sch. 2013; 2 (1): 16–23.
  21. Pawaskar P. et al. Development of Normal Phase Liquid Chromatographic Method for determination of Methyl (-) – (R) – (o- chlorophenyl) -6, 7- dihyrothieno [3, 2-C] pyridine -5(4H) acetate, hydrogen sulphate from ClopidogrelBesylate. Int. J. Pharm Sci. 2013; 5 (1): 1971–6.
  22. Аносова Л.С. Химико-токсикологическое исследование клопидогрела. COLLECTIVE MONOGRAPH «The modern stage of the deve- lopment of medical education in Ukraine and EU countries». Medical Univer- sity of Lublin. Poland. 2021; 1–25. DOI: 10.30525/978-9934-26-090-2-1
  23. Бондар В.С., Аносова Л.С., Шовкова З.В. Ідентифікація клопідогрелю та його метаболіту за допомогою методу тонкошарової хроматографії. Укр. мед. альм. 2013; 16 (1): 50–2.
  24. Бондар В.С., Аносова Л.С. Екстракційно-фотометричне визначення клопідогрелю. Укр. мед. альм. 2012; 15 (5) (додаток): 43–4.
  25. Бондарь В.С., Аносова Л.С., Шовковая З.В. Изолирование клопидогрела и его метаболита из биоматериала. Фармация Казахстана. 2013; 7: 34–7.
  26. Бондарь В.С., Аносова Л.С., Шовковая З.В. Изолирование клопидогрела и его метаболита из биологических жидкостей. Фармация Казахстана. 2013; 9: 59–60.
  27. SOFT/AAFS Forensic Laboratory Guidelines. 2006; 24. [Электронный ресурс]. Available at: http://www.soft–tox.org/files/ Guidelines_2006_Final.pdf. (дата обращения 12.06.2022).