Опыт разработки биоаналитических методик методом ВЭЖХ с УФ-детектированием

Введение. Одним из наиболее часто применяемых в настоящее время методов для количественного анализа лекарственных веществ в биопробах, полученных при изучении фармакокинетики, биоэквивалентности или лекарственного мониторинга, является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием. Он отличается гибкостью, позволяющей создавать множество методик с различными вариантами условий хроматографического разделения, детектирования, процедуры подготовки проб и др., ориентированных на конкретные целевые аналиты, учитывающие их свойства и особенности. Вместе с тем по мере накопления опыта и обобщения данных формируются те или иные закономерности, выявляются наиболее часто встречающиеся, удобные вариации, приемы или их сочетания. Материал и методы. Представлен обзор экспериментального опыта по разработке биоаналитических методик с применением метода ВЭЖХ с УФ-детектированием для количественного анализа лекарственных веществ природного и синтетического происхождения в биопробах, полученных при изучении фармакокинетики и биоэквивалентности. Представленные материалы объединяют как методики, разработанные для фармакокинетических исследований, проводимых с использованием лабораторных животных (крыс, кроликов), так и для исследований по биоэквивалентности, выполняемых с участием здоровых добровольцев. Результаты и обсуждение. Отмечено, что практически во всех случаях анализ выполнен в варианте обращенно-фазовой ВЭЖХ на аналитических колонках типа С18. В большинстве случаев (68%) подобраны изократические режимы элюирования со временем удерживания целевого аналита в диапазоне 4–8 мин; в 63% случаев в качестве элюента выбраны смеси водного раствора трифторуксусной кислоты и ацетонитрила в различных соотношениях. Выделено три области УФ-спектра, наиболее часто используемые для детектирования – 205–220 нм (25% случаев), 220–254 нм (31%) и 270–295 нм (35%), в 9% случаев используются другие длины волн, что характеризует общие особенности спектров поглощения органических соединений. Для подготовки биопроб плазмы крови перед дозированием в ВЭЖХ систему использованы экстракционная (36% случаев) и осадительная пробоподготовки (64% случаев). Наиболее употребительным оказалось осаждение белков плазмы ацетонитрилом (64%); метанол (15,5%) и кислотные или иные осадители (20,5%) оказались оптимальны примерно в одинаковом числе случаев. По результатам валидационных испытаний установлено, что для большинства методик нижний предел количественного определения находится в диапазоне около 0,01–0,1 мкг/мл, что согласуется с литературными данными (0,05–0,1 мкг/мл).