Применение методов флюоресцентного окрашивания для определения микроорганизмов в фармацевтическом анализе

DOI: https://doi.org/10.29296/25419218-2019-08-01
Номер журнала: 
8
Год издания: 
2019

О.В. Гунар, Н.Г. Сахно, М.В. Рощина Научный центр экспертизы средств медицинского применения Министерства здравоохранения Российской Федерации; Российская Федерация, 127051, Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

Стандартные методы обнаружения и количественного определения бактерий и грибов из лекарственных средств (ЛС) не подходят для быстрой оценки (менее 24 ч) и выделения поврежденных или находящихся в некультивируемом состоянии микроорганизмов. Рассмотрены альтернативные методы прямого определения микробных клеток в образце при помощи флюоресцентного окрашивания, ключевого этапа, например таких современных технологий, как микроскопия, проточная и твердофазная цитометрия, не имеющих в настоящее время широкого применения в практике фармацевтического анализа из-за методических сложностей. Описаны широко используемые в научно-исследовательских и практических целях различные флюорохромы, особенности и ограничения их применения, проведен обзор физиологических и таксономических флюоресцентных красителей. Подчеркиваются значимость и перспективность флюоресцентного окрашивания исследуемых образцов в сочетании с современными развивающимися технологиями, делается вывод о том, что применение различных флюорофоров на практике требует тщательного подбора условий, разработки и валидации методик проведения анализа.

Ключевые слова: 
фармацевтический анализ
определение микроорганизмов
флюоресцентное окрашивание
флюорохром
Для цитирования: 
Гунар О.В., Сахно Н.Г., Рощина М.В. Применение методов флюоресцентного окрашивания для определения микроорганизмов в фармацевтическом анализе . Фармация, 2019; 68 (8): 5-9https://doi.org/10.29296/25419218-2019-08-01

Список литературы: 
  1. Балалаева И.В. Проточная цитофлуориметрия. Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2014; 75. [Balalaeva I.V. Flow cytofluorimetry. Nizhny Novgorod: Nizhny Novgorod State University, 2014; 75 (in Russian)].
  2. Suller M.T.E., Stark J.M., Lloyd D. A flow cytometric study of antibiotic-induced damage and evaluation as a rapid antibiotic susceptibility test for methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1997; 40 (1): 77–83. https://doi.org/10.1093/jac/40.1.77
  3. Vanhee L., Nelis H., Coenye T. Detection and quantification of viable airborne bacteria and fungi using solid-phase cytometry. Nature Protocols, 2009; 4: 224 – 31. https://doi.org/10.1038/nprot.2008.228
  4. Ramani R., Ramani A., Wong S.J. Rapid flow cytometric susceptibility testing of Candida albicans. Journal of clinical microbiology, 1997; 35 (9): 2320 –4.
  5. Rudensky B., Broidie E., Yinnon A.M. et al. Rapid flow-cytometric susceptibility testing of Candida species. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2005; 55 (1): 106 –109. https://doi.org/10.1093/jac/dkh492
  6. Chaturvedi V., Ramani R., Pfaller M.A. Collaborative study of the NCCLS and flow cytometry methods for antifungal susceptibility testing.of Candida albicans. Journal of clinical microbiology, 2004; 42 (5): 2249 –51. https://doi.org/10.1128/jcm.42.5.2249-2251.2004
  7. 7. Gauthier C., St-Pierre Y., Villemur R. Rapid antimicrobial susceptibility testing of urinary tract isolates and samples by flow cytometry. Journal of Medical Microbiology, 2002; 51 (3): 192–200. https://doi.org/10.1099/0022-1317-51-3-192
  8. 8. Van Belkum A., Dunne W.M. Next-generation antimicrobial susceptibility testing. Journal of Clinical Microbiology, 2013; 51 (7): 2018–24. https://doi.org/10.1128/JCM.00313-13
  9. 9. Riley B. Rapid Microbiology Methods in the Pharmaceutical Industry. American pharmaceutical review, 2006 [Electronic resource]. Access mode: http://www.americanpharmaceuticalreview.com/Featured-rticles/113094-Rapid-Microbiology-Methods-in-the-Pharmaceutical-Industry
  10. 10. Гунар О.В., Сахно Н.Г. Количественное определение микроорганизмов-контаминантов лекарственных средств с использованием системы «Milliflex® quantum». Фармация, 2019; 68 (3): 5–11. [Gunar O.V., Sakhno N.G. Quantitative detection of microbial contaminants of drugs, by using the «Milliflex® quantum system». Farmatsiya, 2019. 68 (3): 5–11. https://doi.org/10.29296/25419218-2019-03-01 (in Russian)].
  11. 11. Gordon O., Goverde M., Staerk A., Roesti D. Validation of Milliflex® Quantum for Bioburden Testing of Pharmaceutical Products. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology, 2017; 71 (3): 206–24. https://doi.org/10.5731/pdajpst.2016.007450
  12. 12. Сайфитдинова А.Ф. Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов. СПб.: 2011; 110. [Saifitdinova A.F. Two-dimensional fluorescence microscopy for the analysis of biological samples. SPb.: 2011; 110 (in Russian)].
  13. 13. Jeppe L. Nielsen, Robert J. Seviour, Per H. Nielsen Chapter 7. Microscopy. Experimental methods in wastewater treatment, 1st ed., ed. M C M van Loosdrecht; Per Halkjær Nielsen; Carlos Manuel López Vázquez; Damir Brdjanovic. London : IWA Publishing, 2016; 263–84.
  14. 14. Lavis L.D., Raines R.T. Bright Ideas for Chemical Biology. ACS Chemical Biology 3 – 2008; 3: 142—55. https://doi.org/10.1021/cb700248m
  15. 15. Hong S.D., Dhong H.J., Chung S.K. et al. Hematoxylin and eosin staining for detecting biofilms: practical and cost-effective methods for predicting worse outcomes after endoscopic sinus surgery. Clinical and Experimental Otorhinolaryngology, 2014; 7:1 93–197. https://doi.org/10.3342/ceo.2014.7.3.193
  16. 16. Дивянин Н.Н. Получение и исследование флуорофоров для создания «флуоресцентного языка». М.:, 2017. [Divyanin N.N. Obtaining and researching fluorophores to create a «fluorescent language». Moscow, 2017 (in Russian)].
  17. 17. Нетрусов А.И., Бонч-Осмоловская Е.А., Горленко В.М. и др. (Под ред. А.И. Нетрусова). Экология микроорганизмов. М.: Академия, 2004; 272. [Netrusov A.I., Bonch-Osmolovskaya E.A., Gorlenko V.M. et al. (by ed. A.I.Netrusov). Ecology of microorganisms. Moscow: Academy, 2004; 272 (in Russian)].
  18. 18. Воробьев И.А., Рафаловская-Орловская Е.П., Гладких А.А. Флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы в микроскопии и цитометрии. Цитология, 2011; 53 (5): 392–403. [Vorobiev I.A., Rafalovskaya-Orlovskaya E.P., Gladkikh A.A. Fluorescent semiconductor nanocrystals in microscopy and cytometry. Cytologiya, 2011; 53 (5): 392–403 (in Russian)].
  19. 19. Олейников В.А., Суханова А.В., Набиев И.Р. Флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллы в биологии и медицине. Российские нанотехнологии, 2007; 2 (1–2): 160–73. [Oleinikov V.A., Sukhanova A.V., Nabiev I.R. Fluorescent semiconductor nanocrystals in biology and medicine. Rossiyskie nanotexnologii, 2007; 2 (1-2): 160–73 (in Russian)].
  20. 20. Lee S.F., Osborne M.A. Brightening, blinking, bluing and bleaching in the life of a quantum dot: friend or foe? Physical Chemistry Chemical Physics, 2009; 10 (13): 2174–91. DOI: 10.1002/cphc.200900200
  21. 21. Залесский В.Н. Молекулярная диагностика: лазерная сканирующая и проточная цитометрия в исследовании апоптоза. Украинский медицинский журнал «Часопис», 2010; 4 (78): 27–31. [Zalessky V.N. Molecular diagnostics: laser scanning and flow cytometry in the study of apoptosis. Ukrainian Medical Journal «Chasopis», 2010; 4 (78): 27–31 (in Ukrainian)].
  22. 22. Davey H.M., Kell D.B. Flow cytometry and cell sorting of heterogeneous microbial populations: the importance of single-cell analyses. Microbiological reviews, 1996; 60 (4): 641–96.
  23. 23. Diaper J.P., Edwards C. The use of fluorogenic esters to direct viable bacteria by flow cytometry. Journal of Applied Bacteriology, 1994; 77: 221–8. https://doi.org/10.1111/j.1365-2672.1994.tb03067
  24. 24. Breeuwer P., Drocourt J.L., Bunschoten N. et al. Characterization of uptake and hydrolysis of fluorescein diacetate and carboxyfluorescein diacetate by intracellular esterases in Saccharomyces cerevisiae, which result in accumulation of fluorescent product. Applied and Environmental Microbiology, 1995; 61(4): 1614–9.
  25. 25. Von Nebe-Caron G., Badley R.A. Viability assessment of bacteria in mixed populations using flow cytometry. 1995; 179 (1): 55–66. https://doi.org/10.1111/j.1365-2818.1995.tb03612